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酶抑制法快速检测农药残留

时间:2019-01-20 13:03:01 来源:凤凰娱乐时时彩 作者:匿名



鉴于常规测试所需的昂贵且笨重的设备,需要熟练的专业技术人员在实验室中进行取样测试,这难以满足快速现场测试的要求。各国的科技工作者也应用新的原则和技术。试图研究开发一系列快速检测的新方法,具有高特异性,高灵敏度,方便,快速,准确,安全,简便,价廉的特点。本研究重点介绍了酶抑制,免疫分析和生物传感器在国内外快速检测农药残留方面的研究和应用,以及酶抑制,免疫分析和生物传感器快速检测农药残留的前景。未来的发展趋势。

酶抑制方法利用有机磷和氨基甲酸酯类农药特异性抑制昆虫中枢和外周神经系统中乙酰胆碱酯酶(AChE)的活性,引起乙酰胆碱在神经递质中的积累,影响正常传导,并导致昆虫中毒死亡。这种毒理学原理,AChE与样品发生反应。如果样品中没有农药残留或残留量很小,则AChE的活性不受抑制。相反,如果农药残留量相对较高,农药会抑制AChE的活性。 。可以通过添加底物和显色剂来观察有机磷或氨基甲酸酯类农药残留物的存在,以观察颜色变化或物理化学信号的变化,以确定酶反应试验中的特定化合物反应。目前,根据酶抑制法原理设计的农药残留检测方法主要包括快速检测卡法(纸法),比色法(分光光度法)和胆碱酯酶生物传感器。

1.1速度测试卡方法(纸张方法)

将胆碱酯酶(ChE)和乙酰胆碱类似物靛酚乙酸酯分别固化并装载到滤纸上。吲哚酚乙酸酯在ChE催化下快速经历水解,形成乙酸和靛酚(蓝色)。如果ChE与机器磷或氨基甲酸酯类农药结合,则催化乙酸靛酚水解的能力丧失。因此,只要样品中存在微量的有机磷或氨基甲酸酯类农药,就可以有效地抑制蓝色靛酚的形成,并且可以通过目测来判断农药残留:蓝色(即空白对照卡颜色)或天蓝色。颜色(负片),浅蓝色或白色(正片)。包括卫生部食品卫生监督检验研究所在内的7个单位的实验和验证数据的统计结果表明,快速检测卡法(纸张法)对常用农药的检出限为0.3~3.5 mg/kg [7],都很高。使用国家标准农药残留限量。因此,当快速测试卡用于测试蔬菜样品为阳性时,可以认为有机磷或氨基甲酸酯类农药已超标。该方法的检出时间为15~30 min,有机磷和氨基甲酸酯类农药的有效检出率超过允许残留量或中国国家标准的非法使用率可达80%以上。该方法不需要仪器,操作方便快捷,测试成本低,适合现场筛选。国内企业利用该方法原理生产的商品化快速检测卡和速度表适用于生产基地,农贸市场和超市的一般农药残留的现场检查和筛选。1.2比色法(分光光度法)

蔬菜和水果中的农药残留样品和从敏感生物中提取的ChE(GB/T 5009.199-2003推荐的AChE,NY/T 448-2001推荐的丁酰胆碱酯酶(BuChE),GB/T 18630-2002推荐使用小麦酯酶),硫代乙酰胆碱(GB/T 5009.199-2003)或硫代丁酸硫氰酸盐(NY/T 448-2001)或硫代乙酰胆碱碘化物(GB/T 18630-2002)作为底物,二硫代二硝基苯甲酸(GB/T 5009.199-2003,NY/T 448- 2001)或2,6-二氯吲哚酚(GB/T 18630-2002)一段时间后,着色剂用分光光度法在波长412nm(GB/T 5009.199-2003)或410 nm(NY/T)下使用。 448-2001)或600nm(GB/T 18630-2002)。根据吸光度的变化(GB/T 5009.199-2003,NY/T 448-2001)计算ChE的抑制率,或直接用吸光度值(GB/T 18630-2002)判断有机磷和氨基甲酸酯类农药残留。量是否超标[GB/T 5009.199-2003规定抑制率≥50%(正值),NY/T 448-2001抑制率≥70%(正值),GB/T 18630-2002吸光度值<0.7(未检验)输出); 0.7~0.9(可检测到);

0.9(签出)]。

比色法(分光光度法)检出限一般为0.05~5.00 mg/kg,检测时间为30 min。对检测超过允许残留量或非法使用中国国家标准的有机磷和氨基甲酸酯类农药有效。率可达80%以上。国内企业根据GB/T5009.199-2003或NY/T 448-2001修改分光光度计,使其适用于比色检测要求。目前国内常用的农药残留检测仪是多通道光路设计,可以同时检测多个样品,直接显示检测结果,还有数据接口,通过数据管理软件上传测试数据,实现数据共享和在线传输,并具有高度自动化。是各省,市,县质检总局的日常检查。主要测速仪器。AChE和BuChE是酶抑制方法的关键和核心,影响ChE活性和稳定性的因素很多。因此,必须设定用于快速检测酶抑制的酶的标准。目前,只有农业部发布了行业标准《NY/T 1157—2006农药残留检测专用丁酰胆碱酯酶》[9],BuChE的外观,比活性,定性(包括SDS-PAGE,Km值,布比卡因抑制试验),稳定性,灵敏度,装置等技术指标明确界定。但是,由于缺乏相应的国家标准,最常用的AChE活动指标,定性,稳定性和灵敏度没有统一的检测和鉴定标准,导致

内部市场中AChE的质量参差不齐,严重影响了快速测试结果的准确性。此外,中国目前三种蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的快速检测标准已经发布10年或更长时间。在过去10年中,中国多次修订了农药残留限量标准。最新版本的《GB 2763—2012食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量》[10]自2013年3月1日起实施;近年来,已经获得了快速检测产品及其配套试剂。快速发展,积累了大量的实际应用实践经验,为下一步修订和更新蔬菜中的有机磷和氨

氨基甲酸酯类农药残留的快速检测标准奠定了坚实的基础。

引用:

[1] Lehotay S J.用于测定农药残留的快速,简便,廉价,有效,坚固和安全(QuEChERS)方法[M]。欧洲农药残留研讨会,EPRW,罗马,摘要书,2002年。

[2] Anastassiades M,Tasdelen B,Scherbaum E. QuEChERS方法的新进展[M]。 EPRW 2006. Korfu,Books ofAbstracts,2006。[3] Anastassiades M,Scherbaum E,Tasdelen B,et al。 QuEChERS农药多残留分析方法学的最新进展QuEChERS农药化学[M]。作物保护,公共卫生,环境安全;由HOhkawa,H Miyagawa和PW Lee编辑; WILEY- VCH Verlag GmbH